一、實驗介紹
早期的shRNA載體多(duō)採用(yòng)RNA聚合酶III型啟動子介導shRNA的表達,RNA聚合酶III型啟動子如鼠源的U6啟動子和人源的H1啟動子可(kě)以在哺乳動物(wù)細胞中(zhōng)表達小(xiǎo)分(fēn)子RNA,隨著miRNA幹擾機制的深入研究,發展出第二代siRNA載體,即採用(yòng)RNA聚合酶II型啟動子CMW表達含測翼序列的miRNA模擬物(wù),該載體模擬miRNA的加工(gōng),表達出來的shRNA進入RISC沉默複合物(wù)的效率要比RNA聚合酶III型啟動子表達的shRNA高十倍,抑制效率更好,且可(kě)以和EGP協調表達,方便觀察轉染效率
二、實驗週期
30-35工(gōng)作(zuò)日
三、交付標準
>10ug shRNA載體,已確認shRNA目標基因轉染成功的細胞株,實驗報告,根據實驗要求,選擇蛋白質檢測或分(fēn)子生物(wù)學檢測
四、客戶提供
目的基因NCBI登陸號
五、實驗流程
設計幹擾靶點
構建幹擾載體 培養293T細胞 靶基因表達豐度檢測
豐度高-內源篩選 幹擾質粒轉染293T細胞 QPCR檢測幹擾效果
豐度低-外源篩選 靶基因真核表達載體構建 幹擾質粒與表達載體轉染293T細胞 QPCR檢測幹擾效果
Copyright 2010 MDBio版權所有(yǒu)
E-mali:mdbio@mdbio.com.cn 地址:山(shān)東省青島市崂山(shān)區(qū)株洲路120 傳真:0532-88706863
京ICP證000000号
求索科(kē)技(jì )