一、實驗介紹
常規轉染技(jì )術可(kě)分(fēn)為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久性轉染),前者外源DNARNA不整合到宿主染色體中(zhōng),雖然可(kě)以達到高水平表達,但通常隻能(néng)維持幾天,在轉染後的24-72小(xiǎo)時內分(fēn)析結果,後者外源質粒DNA整合到宿主細胞染色體上,使宿主細胞可(kě)長期表達目的基因及蛋白,需要在瞬時轉染基礎上對靶細胞性行篩選,篩選得到的細胞可(kě)穩定表達目的蛋白,用(yòng)於蛋白的擴增及富集,或得到穩定沉默特定基因的細胞株
二、實驗週期
5-7 工(gōng)作(zuò)日(瞬時轉染) 50-60 工(gōng)作(zuò)日(穩定轉染)
三、交付標準
細胞、實驗結果報告(材料、方法、數據分(fēn)析、實驗結果)
四、客戶提供
瞬時轉染客戶提供:待轉染細胞株及細胞培養相關信息、待轉染的質粒、目的基因信息、目的蛋白抗體
常規細胞或特殊細胞穩定轉染(質粒轉染)客戶提供:待轉染細胞株、待轉染質粒(包括質粒測序結果)、目的基因信息、目的蛋白抗體
五、實驗流程
順時轉染:調整細胞狀態 細胞轉染 24、48、72hr檢測目的基因的表達
穩定轉染:調整細胞狀態 細胞轉染 抗生素篩選 混合穩轉株獲得 穩轉細胞株鑑定
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