WB/SDS PAGE新(xīn)品 - 青島生物(wù)科(kē)技(jì )

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FlexiRun™ Solution(濃縮膠分(fēn)離膠快速凝膠預混液

産(chǎn)品名(míng)稱：FlexiRun Solution

中(zhōng)文(wén)別名(míng): 濃縮膠分(fēn)離膠快速凝膠預混液

産(chǎn)品編碼：ZL001FR-500ml

MDBio自主研發産(chǎn)品

産(chǎn)品說明書.pdf1 産(chǎn)品說明書.pdf2

産(chǎn)品介紹
實驗用(yòng)途

FlexiRun™ 是一種Acrylamide膠預混液，該預混液安(ān)全、快速、操作(zuò)簡單、解析度高

能(néng)在10分(fēn)鍾以内完成制膠（夏季3-5分(fēn)鍾）。

本品 20%濃度，用(yòng)水稀釋即可(kě)，可(kě)根據蛋白大小(xiǎo)配制相應濃度積層膠和分(fēn)離膠

隻需加APS和TEMED，分(fēn)離膠灌膠後不用(yòng)等待凝膠，可(kě)直接灌積層膠

（無需加水壓線(xiàn)，無需等待分(fēn)離膠凝膠）。

注意：

1.APS和TEMED品質(zhì)的好壞會影響凝膠時間，請用(yòng)新(xīn)鮮配制的APS;

2.由于凝膠速度快,請勿比照傳統制膠方式采用(yòng)槍頭轉移進行灌膠;

3.灌入分(fēn)離膠後記得取起制膠架輕輕拍敲桌面以利膠體(tǐ)鍵結緊實;

4.分(fēn)離膠與濃縮膠之間無須用(yòng)水壓平,因此灌上層濃縮膠時不要在固定位點擠壓灌膠;

5.抽拔齒梳時, 齒梳左右二邊一定要平,輕緩慢慢拔起;

操作(zuò)方式:

1.采用(yòng)超純水在我公(gōng)司所送的二個擠壓瓶中(zhōng)個别稀釋,再加入相應比例TEMED和APS後即可(kě)進行灌膠

(等同傳統計算方式:TEMED為(wèi)配膠總體(tǐ)積的千分(fēn)之一,APS為(wèi)配膠總體(tǐ)積的百分(fēn)之一)

2.先取分(fēn)離膠擠壓瓶在玻璃闆中(zhōng)空縫隙中(zhōng)選擇一位點擠壓灌入制作(zuò)分(fēn)離膠,

3.然後将整座制膠架取起,輕輕拍敲桌面兩下

4.再取濃縮膠擠壓瓶在玻璃闆中(zhōng)空縫隙中(zhōng)左右移動輕輕擠壓灌入制作(zuò)濃縮膠

5.插上齒梳等待凝膠

分(fēn)離膠及濃縮膠擠壓瓶中(zhōng)的剩餘預混液凝結成果凍狀後,即代表已凝膠

用(yòng)于制備SDS Page凝膠或WB實驗凝膠

學(xué)習Western Blot技(jì )術，首先要學(xué)習的就是手灌膠技(jì )術。

手灌膠技(jì )術是WB實驗中(zhōng)最基本的技(jì )術，雖然現在預制膠橫行天下

但是對于某些特定蛋白或比較極端分(fēn)子量的蛋白，

預制膠達不到好的分(fēn)離效果

有(yǒu)些表達量極低的蛋白預制膠膠孔達不到足夠上樣量

我們就需要根據待分(fēn)離蛋白的特性來配制聚丙烯酰胺凝膠

傳統制膠及步驟繁瑣之處:

（1）手灌膠各成分(fēn)介紹；

a.丙烯酰胺：形成聚丙烯酰胺的基本物(wù)質(zhì)，具(jù)有(yǒu)神經毒性及緻癌性（WB所用(yòng)試劑幾乎都具(jù)有(yǒu)強毒性，做好實驗的前提，先要保護好自己）；

b.Tris-Hcl:在蛋白電(diàn)泳中(zhōng)與Gly構成緩沖體(tǐ)系，穩定電(diàn)泳過程中(zhōng)的PH穩定，Tris（氨丁三醇）可(kě)緻癌；

c.過硫酸铵（AP）：相當于催化劑作(zuò)用(yòng)，提供兩種丙烯酰胺聚合所必須的自由基；

d.TEMED（四甲基二乙胺）:催化過硫酸铵産(chǎn)生自由基，從而引發聚合反應，促進聚丙烯酰胺凝膠形成（凝固劑）,具(jù)有(yǒu)強烈刺激性氣味（惡臭），并具(jù)強神經毒性；

e.SDS（十二烷基硫酸鈉）：能(néng)使蛋白變性，具(jù)有(yǒu)呼吸刺激性。

（2）常用(yòng)分(fēn)離膠濃度與最佳分(fēn)離範圍；

分(fēn)離膠濃度	最佳分(fēn)離範圍（kD）
6%	50—150/60-220
8%	30—90
10%	20—80
12%	12—60
15%	10–40

備注：分(fēn)離膠濃度越大，最佳分(fēn)離蛋白分(fēn)子量越小(xiǎo)。

（3）分(fēn)離膠配制(兩塊膠量—10ml)；

成分(fēn)	分(fēn)離膠濃度
成分(fēn)	6%	8%	10%	12%	15%
超純水	5.3ml	4.6ml	4ml	3.3ml	2.3ml
30%丙烯酰胺	2ml	2.7ml	3.3ml	4ml	5ml
1.5M Tris（PH8.8）	2.5ml	2.5ml	2.5ml	2.5ml	2.5ml
10%SDS	100μl	100μl	100μl	100μl	100μl
10%AP	100μl	100μl	100μl	100μl	100μl
TEMED	4μl	4μl	4μl	4μl	4μl

備注：我們所說的膠濃度，實際是指丙烯酰胺濃度。

（4）濃縮膠配制：

成分(fēn)	4ml量	6ml量
超純水	2.7ml	4.1ml
30%丙烯酰胺	660μl	1.0ml
1.5M Tris（PH6.8）	500μl	750μl
10%SDS	40μl	60μl
10%AP	40μl	60μl
TEMED	4μl	6μl

備注：濃縮膠一般使用(yòng)2—3ml即可(kě)，濃度一般使用(yòng)5%。

（5）聚丙烯酰胺凝膠配制：

a.檢漏，選取清洗幹淨的模具(jù)玻璃，固定于膠固定器上，加入超純水，檢查模具(jù)是否漏液；

b.配制分(fēn)離膠，按所需濃度配制分(fēn)離膠，配制過程中(zhōng)最後加入TEMED，混勻後灌入模具(jù)，防止産(chǎn)生氣泡，并注意高度，最後輕輕加入超純水封口，使液面平整，凝固速度受室溫影響，溫度越高，凝固越快，冬天可(kě)放入孵箱中(zhōng)加速凝固；

c.待水和膠之間出現一道折線(xiàn)時，說明膠已凝固，此時，将水倒出，并用(yòng)吸水紙吸幹殘餘水分(fēn)；

d.濃縮膠配制，按需量配制濃縮膠，同樣最後加入TEMED，灌入分(fēn)離膠上面，灌滿模具(jù)，排氣泡後插入所需梳子，待膠凝固。

膠一般提前一天配制，配制完成後，可(kě)泡到電(diàn)泳液中(zhōng)，存放于4℃冰箱保存，第二天使用(yòng)。

手灌膠技(jì )術是WB的基礎入門級技(jì )術，相對于昂貴的預制膠，手灌膠性價比更高，對某些蛋白分(fēn)離效果更好。

系統的掌握WB技(jì )術，依賴于預制膠遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，預制膠雖然節省了配膠的時間，但還是有(yǒu)特殊蛋白需要手灌膠進行分(fēn)離。

采用(yòng)FlexiRun快速凝膠預混液簡易之處:

采用(yòng)超純水在我公(gōng)司所送的二個擠壓瓶中(zhōng)個别稀釋,再加入相應比例TEMED和APS後(等同傳統計算方式),即可(kě)進行灌膠,先取分(fēn)離膠擠壓瓶在玻璃闆中(zhōng)空縫隙中(zhōng)選擇一位點擠壓灌入制作(zuò)分(fēn)離膠,然後将整座制膠架取起,輕輕拍敲桌面兩下,再取濃縮膠擠壓瓶在玻璃闆中(zhōng)空縫隙中(zhōng)左右移動輕輕擠壓灌入制作(zuò)濃縮膠後即可(kě)插上齒梳等待凝膠