ReScript^TMII Reverse Transcriptase是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基礎上通過分(fēn)子進化技(jì )術多(duō)點突變的新(xīn)一代反轉錄酶，大幅度提高了穩定性和反轉錄效率。Rescript^TMII RT SuperMix for qPCR(+gDNA Eraser)适用(yòng)于兩步法qRT-PCR檢測。試劑盒中(zhōng)的4×gDNA Eraser Mix可(kě)去除RNA模闆中(zhōng)殘留的基因組DNA，保證後續定量結果的準确性。5×ReScript^TMII RT SuperMix II中(zhōng)含有(yǒu)反轉錄第一鏈合成所需的所有(yǒu)組分(fēn)（Buffer，dNTP Mixture，ReScript^TMII Reverse Transcriptase，RNase Inhibitor，Random 6 mers/Oligo (dT)Primer Mix），加入模闆RNA和水即可(kě)迅速進行反應，同時終止gDNA Eraser作(zuò)用(yòng)，保證cDNA的完整性。

本試劑盒針對qPCR進行Random 6 mers/Oligo (dT)Primer的比例優化，使cDNA合成可(kě)從RNA轉錄本的各個區(qū)域起始，并具(jù)有(yǒu)相同的反轉錄效率，最大程度保證了qPCR結果的真實性和可(kě)重複性。反轉錄産(chǎn)物(wù)兼容SYBR Green和探針法qPCR，可(kě)以根據實驗目的，選擇相應的試劑配合使用(yòng)，進行高性能(néng)的基因表達分(fēn)析。

 

 

注意事項 

 

1. 高質(zhì)量的完整的RNA對于獲得高質(zhì)量的cDNA是至關重要的。實驗前請用(yòng)電(diàn)泳驗證RNA的完整性。 

2. 建議RNA是溶于水而不是TE中(zhōng)，因為(wèi)TE中(zhōng)的EDTA會對反轉錄反應産(chǎn)生抑制。 

3. 20 µl反轉錄反應體(tǐ)系中(zhōng)，建議Total RNA加入不超過2 μg，mRNA不超過200 ng，否則加入RNA量過高，可(kě)能(néng)會超出後續qPCR的線(xiàn)性範圍。 

4. 4×gDNA Eraser Mix、5×ReScript^TMII RT SuperMix II和5×No RTase Control Mix含有(yǒu)高濃度的甘油，粘度高，在使用(yòng)前請短暫離心收集到離心管底部，并用(yòng)移液槍輕輕吸打充分(fēn)混勻後，準确吸取，并且不要使Tip插入液面過深，否則會因Tip壁粘着造成損失。 

5. 可(kě)以不經過基因組去除步驟，直接用(yòng)5×ReScript^TMII RT SuperMix II進行反轉錄，這樣所得到的結果會與使用(yòng)ReScript^TMII RT SuperMix for qPCR相當。但是請勿将gDNA Eraser與其他(tā)試劑盒中(zhōng)的5×ReScript^TMII RT SuperMix配套使用(yòng)，因其不含終止gDNA Eraser反應的成分(fēn)，會影響反轉錄和後續的qPCR實驗。 

6. cDNA産(chǎn)物(wù)僅适用(yòng)于qPCR反應，如果下遊實驗進行基因克隆等長(cháng)片段PCR擴增，可(kě)使用(yòng)Rescript^TMII 1st Strand cDNA Synthesis Kit進行操作(zuò)。

組成及包裝(zhuāng)量

   

組分(fēn)	100 rxn (20 μl/rxn)
4× gDNA Eraser Mix	400 μl
5× ReScriptTM II RT SuperMix II	400 μl
5× No RTase Control Mix*	40 μl
RNase free H2O	2 × 1 ml