Bradford試劑蛋白定量是一種快速、即用(yòng)型的總蛋白光學(xué)定量方法。在酸性條件下，考馬斯亮藍G-250染料與蛋白質(zhì)疏水區(qū)結合，導緻最大吸收峰由465 nm變為(wèi)595 nm，同時顔色也由棕色變為(wèi)藍色，該藍色化合物(wù)顔色的深淺與蛋白質(zhì)濃度的高低成正比關系。将蛋白質(zhì)樣品或稀釋的BSA與Bradford試劑混合，測量在595 nm處的吸收值，在由一系列稀釋的BSA建立的标準曲線(xiàn)的情況下，蛋白質(zhì)的濃度可(kě)以根據标準曲線(xiàn)而确定。

Bradford實驗原理(lǐ)：考馬斯亮藍G250,在遊離狀态下呈棕色，最大光吸收在488nm；當它與蛋白質(zhì)結合後變為(wèi)藍色，蛋白質(zhì)—色素結合物(wù)在595nm波長(cháng)下有(yǒu)最大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可(kě)用(yòng)于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍結合在2min左右的時間内達到平衡，完成反應十分(fēn)迅速；其結合物(wù)在室溫下1h内保持穩定。該法試劑配制簡單，操作(zuò)簡便快捷，反應非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍，可(kě)測定微克級蛋白質(zhì)含量。

一、優點

1. 靈敏度高，據估計比Lowry法約高四倍，其最低蛋白質(zhì)檢測量可(kě)達1ug。這是因為(wèi)蛋白質(zhì)與染料結合後産(chǎn)生的顔色變化很(hěn)大，蛋白質(zhì)-染料複合物(wù)有(yǒu)更高的消光系數，因而光吸收值随蛋白質(zhì)濃度的變化比Lowry法要大的多(duō)。

2. 測定快速、簡便，隻需加一種試劑。完成一個樣品的測定，隻需要5分(fēn)鍾左右。由于染料與蛋白質(zhì)結合的過程，大約隻要2分(fēn)鍾即可(kě)完成，其顔色可(kě)以在1小(xiǎo)時内保持穩定，且在5分(fēn)鍾至20分(fēn)鍾之間，顔色的穩定性最好。因而完全不用(yòng)像Lowry法那樣費時和嚴格地控制時間。

3.幹擾物(wù)質(zhì)少。如幹擾Lowry法的K+，Na+，Mg2+離子，Tris緩沖液，糖和蔗糖，甘油，巯基乙醇，EDTA等均不幹擾此測定法。

二、缺點

1. 由于各種蛋白質(zhì)中(zhōng)的精(jīng)氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此Bradford法用(yòng)于不同蛋白質(zhì)測定時有(yǒu)較大的偏差，在制作(zuò)标準曲線(xiàn)時通常選用(yòng)g球蛋白為(wèi)标準蛋白質(zhì)，以減少這方面的偏差。

2. 仍有(yǒu)一些物(wù)質(zhì)幹擾此法的測定，主要的幹擾物(wù)質(zhì)有(yǒu):去污劑、Triton X-100、十二烷基硫酸鈉(SDS)和0.1N的NaOH。(如同0.1N的酸幹擾Lowary法一樣)。

3. 标準曲線(xiàn)也有(yǒu)輕微的非線(xiàn)性，因而不能(néng)用(yòng)Beer定律進行計算，而隻能(néng)用(yòng)标準曲線(xiàn)來測定未知蛋白質(zhì)的濃度。